NK细胞无血清基础培养基套装

产品概述 

NK细胞无血清培养套装是一款专为NK细胞培养而设计的无血清、无异源动物源成分的纯因子体外诱导扩增培养试剂盒， 包括 NK 细胞无血清基础培养基、CUNK I、CUNK II 和CUNK III。

本产品适用于从人外周血单个核细胞（PBMC）、 脐带血单个核细胞中选择性扩增 NK 细胞。 本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养。

产品/组分信息 

储存方式

组分A， 2 ℃~ 8℃ 保存，1年有效。组分B 、C、D， -25℃ ~ -15℃ 保存，1年有效。

使用说明

PBMC 中 NK 细胞的激活和扩增培养

以新鲜 PBMC、纯因子激活体系、添加热灭活自体血浆培养为例：

1. 预处理 ：室温下融化细胞因子 I，取 15 mL 离心管，加入 3 mL DPBS， 吸取 100 μL 细胞因子 I 至 DPBS  中（若细胞因子 I 一次性用完， 建议吸取 50 mL 离心管内 15 mL DPBS 将细胞因子 I 管冲洗 1 次并加回离心管内）， 上下颠倒混匀，加入T75培养瓶中， 前后左右晃动，使液体分散在瓶底， 37℃ 处理2小时。若不立刻使用， 可置于 4℃ 冰箱处理过夜。

2. 第 0 天，取出预处理的培养瓶， 弃掉包被液，使用 20 mL NK 培养基（可添加 10%的热灭活自体血浆） 重悬 PBMC 接种于 T75 瓶中（推荐接种密度 2×106 cells/mL） ，添加细胞因子 Ⅱ 500 μL， 前后左右晃动，放入 37℃ , 5%CO2   培养箱中培养。

3. 第 3 天，沿培养瓶侧壁缓慢补加 20 mL 的新鲜 NK 培养基，添加细胞因子 Ⅱ 500 μL（可添加 10%的热灭活自体血浆）， 注意不要碰到培养瓶底部，切勿吹打细胞，尽量减少计数、观察等操作， 避免影响细胞初期生长。

4. 第 5 天，取样计数，按照新鲜 NK 培养基与细胞因子III以1000:1的比例进行配制 (也就是40 mL培养基中加入40 uL细胞因子III)（可添加 5%的热灭活自体血浆） ，调整细胞密度 1.0-1.5×106  cells/mL，根据细胞悬液体积进行扩瓶（小于200 mL） 或转入细胞培养袋（大于200 mL）培养。

5. 第 7 天后，每隔一天或两天取样计数补液，调整细胞密度为 0.5-1.0×106  cells/mL，根据细胞悬液体积进行扩瓶小于200 mL） 或转入细胞培养袋（大于200 mL）培养。从第 7 天开始， 可将补加的新鲜 NK 培养基中的热灭活自体血浆含量降至 1%。

6. 培养至第 12-18 天收获细胞。