iPSC 多能干细胞维持培养与克隆传代操作规范

诱导多能干细胞（iPSC）由体细胞重编程获得，是发育生物学、疾病模型、细胞分化研究的重要工具。无饲养层培养体系是目前主流方案，摆脱小鼠滋养层细胞带来的异种污染风险，但是相比 MSC，iPSC 稳定性更差，操作容错率低。

一、培养基础条件

• 无饲养层基质包被培养板；

• iPSC 专用维持培养基；

• 推荐使用 ROCK 抑制剂 Y-27632，减少单细胞传代凋亡；

• 严格控制汇合度，不能过度长满。

二、克隆传代两种方案

1. 小块克隆传代（推荐，稳定性更高）：消化处理，吹成小细胞团块，不吹成单细胞，降低分化风险；

2. 单细胞传代：配合 ROCK 抑制剂，适合单克隆建株、基因编辑之后筛选。

三、多能性鉴定指标

• 形态：致密、边界清晰的圆形克隆；

• 免疫荧光：OCT4、SOX2、NANOG 阳性；

• 流式、qPCR 验证多能基因；

• 畸胎瘤形成实验（体内金标准）。

四、分化防控

• 污染、温度波动、培养基过期、传代过密，都会触发自发分化；

• 出现分化区域及时挑除，避免扩散至整个克隆；

• 培养基避免反复冻融，现配现用添加剂。

君欣生物可提供 iPSC 配套培养试剂、基质包被试剂、多能性染色鉴定服务，支持 iPSC 定向分化外包实验。