细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。EdU (5-Ethynyl-2′-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T) 掺入正在复制的DNA分子中,通过基于EdU 与荧光染料的特异性共轭反应,把荧光集团标记到新合成的含有EdU 的DNA 上面,这样就可以进行高效快速的检测出DNA复制活性,广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复等方面的研究。传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU 检测方法不需要剧烈的DNA 变性,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA 整体结构及细胞内抗原识别位点,操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU 与胸腺嘧啶(T)结构非常相似,而EdU染料大小只有BrdU 抗体的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等), 可有效避免样品损伤,而且无需抗原抗体反应,能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA复制活性。该试剂盒适用于小鼠、大鼠及其它动物模型的各种组织器官的细胞增殖情况检测。
产品编号 | 试剂 | 试剂量 | 保存条件 |
C1703 | EdU 粉末 | 10mg | 室温运输,4°C储存。 |
反应缓冲液 | 1 ml | ||
催化剂溶液 | 400 μl | ||
TAMRA红色荧光溶液 | 25 μl | ||
缓冲添加剂 | 200 mg | ||
Hoechst 33342 | 20 μl |
该试剂盒适用于各种动物活体注射,稳定性较好,对活体无副作用。注射标记后可将目标组织制备为石蜡或冰冻切片进行EdU染色检测。
一、动物实验方法(以1cm×1cm切片为例)
实验前须知
EdU的分子量为252.223,易溶于水,PBS,生理盐水等溶液,便于动物注射使用。
建议EdU的初始给药量为5mg/kg,稀释浓度为0.5 -1mg/ml。具体动物模型的注射剂量可根据相关文献进行调节。
注:1.注射方式:依据客户实验决定,如:腹腔注射、皮下注射、肌肉注射、尾静脉注射等方式。
2.标记时间:最佳标记时间依据具体实验目的而定,增殖快速的组织及器官采用短时间标记(<12小时)(例如小肠),增殖速度慢的组织及器官可采用长时间标记(如7天或更长时间,例如大脑)。
3.标记浓度:最佳标记浓度依据具体实验而定。4.取样部位:根据客户实验目的而定,一次标记可对多种组织和器官进行组织切片。(因小肠上皮组织增殖速度较快,标记时间较短(动物注射6小时后取组织),建议预实验可以取小肠组织检测细胞增殖情况,作为阳性对照。)
*更多介绍见产品说明书
