间充质干细胞无血清培养基套装

一、产品简介

人间充质干细胞无血清培养基套装是化学成分明确、无异种动物源成分的完全培养基套装。适用于脐带、脂肪、骨髓来源的人间充质干细胞无血清条件下的原代分离以及传代扩增培养，能够维持人间充质干细胞多向分化潜能，保障良好的细胞增殖速率。 主要组分包含：氨基酸、维生素、无机盐、白蛋白、细胞因子、胰岛素、微量元素。

二、产品特点

1. 无异种动物源成分，批间差异小；

2. 生产遵循 GMP 指导原则，执行低内毒素质量标准；

3. 完整质量检测：细菌、真菌、霉菌、支原体、pH、渗透压、内毒素检测；

4. 无需对培养板进行包被处理，支持原代细胞分离与传代扩增，细胞扩增效率高。

三、产品规格与储存条件

表格

稳定性说明

1. 整套试剂均需要避光保存；

2. JXM0901-B 添加剂禁止反复冻融，少量多次使用建议分装后-20℃避光存放；

3. 配制完成的完全培养基，2-8℃避光条件可存放 3-4 周；

4. 超过标签标注有效期，禁止使用。

四、完全培养基配制方法

1. 将 JXM0901-B 人间充质干细胞添加剂置于 2-8℃环境完全融化；

2. 将全部 50 mL JXM0901-B 添加剂加入 450 mL JXM0901-A 基础培养基，总体积 500 mL，轻柔充分混匀，即得到人间充质干细胞完全培养基。

备注：双抗不是必需组分；进行原代 P0 细胞分离操作时，建议添加双抗降低污染风险。全程无菌操作。

五、实验操作步骤

5.1 原代干细胞分离（脐带组织块法）

1. 无菌条件下取新鲜脐带，预冷 DPBS 冲洗去除血迹；

2. 将脐带剪为 1-2 cm 脐段，剔除血管、上皮组织，DPBS 洗净，剪至 1 mm³ 细小组织块；

3. 使用无菌滴管，将细小组织块均匀铺放至 6 孔板孔内；

4. 置于 37℃、5% CO₂培养箱孵育 30 min，使组织块贴牢板底；

5. 沿孔内壁缓慢滴加 0.8 ml 完全培养基，禁止直接冲击组织块，防止组织漂浮；

6. 37℃、5% CO₂孵育过夜，次日补加 1 ml 完全培养基；

7. 培养第 6 天进行半量换液；细胞最快 3 天、最晚 14 天会从组织块边缘爬出；第 9、12 天继续半量换液；

8. 后续每 2 天换液，待细胞融合度达到约 80%，开展传代。

关键提示：换液动作轻柔；培养基不宜加入过多，避免组织块漂浮脱落。

5.2 细胞传代与冻存

1. 细胞融合度达到 80% 进行传代；融合度过高会造成细胞分化；吸弃旧培养基，DPBS 轻柔冲洗一次；

2. 加入温和型干细胞消化液，T25 培养瓶建议 1 ml；37℃、5% CO₂消化 3-5 min，轻拍瓶壁帮助细胞脱落；

3. 显微镜确认细胞脱落后吹打分散细胞，1000 rpm 离心 3-5 min；

4. 弃上清，完全培养基重悬细胞沉淀；

5. 传代比例 1:2-1:4；推荐接种密度 8000 cells/cm²，置于 37℃、5% CO₂培养箱；

6. 每 2-3 天更换新鲜培养基；融合至 80% 可再次传代或者冻存；

7. 细胞冻存：收集细胞，使用无血清细胞冻存液重悬，分装冻存管；-80℃放置 24 h 后，转入液氮罐长期保存。

5.3 细胞复苏

重要提示：普通未包被培养瓶做无血清培养容易出现 “生长空洞”，需要提前预处理培养瓶。

1. 向培养瓶（以 T-75 为例）加入 10-15 ml 完全培养基，不要冲击瓶底细胞生长面；平放培养瓶，37℃、5% CO₂孵育 5-10 min，使促贴壁组分结合瓶底；

2. 液氮取出冻存管，37℃水浴 1 min 内快速融化；禁止水浴液面没过管帽，降低污染；

3. 70-75% 酒精擦拭冻存管外壁，超净台内将细胞悬液缓慢滴入含有 5-10 ml 完全培养基的离心管，尽量避免气泡产生；冻存管内可补加 1 ml 培养基冲洗回收残留细胞；

4. 1200 rpm 离心 5 min，弃上清，完全培养基重悬，台盼蓝计数；以 8000 cells/cm² 接种预处理好的培养瓶；加细胞悬液时竖立培养瓶，不要直接冲击瓶底；

5. 轻柔晃动培养器皿，混匀细胞；37℃、5% CO₂饱和湿度静置培养；

6. 培养 2-3 天后更换 37℃预热的新鲜完全培养基。

六、注意事项

1. 本产品仅用于科研体外细胞培养，严禁直接用于人体回输与临床操作；

2. JXM0901-B 添加剂严禁反复冻融，建议按需分装；

3. 全部操作严格执行无菌操作规范；

4. 试剂出现浑浊、沉淀等异常现象，禁止继续使用；

5. 本培养基仅适配人源间充质干细胞，不适合动物来源 MSC 培养；

6. 规格以产品实物包装标签为准。