碱性磷酸酶染色液（偶氮偶联法）

产品组成： 

产品介绍：

碱性磷酸酶( Alkalinephosphatase,      简 称ALP或 AKP) 为一 类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8 。 此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和 毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理 是在pH9.2-9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-B  磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定 位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部 位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。

自备材料：

载玻片、湿盒、普通光学显微镜

操作步骤：(仅供参考)

一 、涂片或切片

1. 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定)。

2. 蒸馏水稍洗5-10s。

3. 滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15-20min,  水洗。

4. 入核固红染色液或甲基绿染色液复染3-5min。

5. 水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

二 、贴壁培养细胞

1. 取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液， PBS清洗干净。

2. 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10-15min,  蒸馏水清洗。

3. 滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15-20min,  蒸馏水清洗。

4. 入核固红染色液或甲基绿染色液复染3~5min。

5.PBS清洗、镜检。

染色结果： 

血液、骨髓涂片结果判断：

一般以积分报告结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行0-4计分。 

注意事项：

1. 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2. 培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3.ALP 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

4. 复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5. 每次染色时，应有阳性对照片。