间充质干细胞 MSC 成脂诱导分化试剂盒

诱导成脂（以12孔板为例）

1、将传代或复苏冻存的间充质干细胞接种到12孔板上，置于37℃,  5% CO2培养箱中培养；当间充质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉间充质干细胞培养基，每孔加500ulPBS清洗一次，吸掉PBS，加入1ml细胞诱导成脂分化培养基。

2、先用干细胞诱导培养基养三天，第四天更换干细胞维持培养基，继续培养三天。

3、再重复步骤2两次。观察是否细胞有脂滴形成。如有可进行染色。

成脂检测染液染色

1、将成脂染色液与水以3:2的比例混匀，室温放置、三个小时内使用。（现用现配）

2、脂肪诱导分化结束后，吸走12孔板中的培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入500ul 4%多聚甲醛，固定10 min。

3、吸走细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，每孔中加入1mL成脂检测染色液室温染色15min。

4、吸走成脂染液，用1×PBS冲洗2-3次。

5、将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果，拍照。

注意：染色后显微镜观察，及时照相。如果时间过长，脂肪滴会自发破裂。

诱导成骨（以12孔板为例）

1、将传代或复苏冻存的间充质干细胞接种到12孔板上，置于37℃,5% CO2培养箱中培养；当间充质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导成骨前体细胞分化。吸掉间充质干细胞培养基，每孔加500ulPBS清洗一次，吸掉PBS，加入1 ml细胞诱导成骨分化培养基。

2、2~3天更换新鲜成骨诱导培养基。

3、诱导7天后，观察细胞的形态变化及生长情况

成骨检测染液染色

1、成骨诱导分化结束后，吸走12孔板中的培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入500ul 4%多聚甲醛，固定10 min。

2、吸走细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，每孔中加入1 mL成骨检测染色液室温染色15min。

3、吸走成骨染液，用1×PBS冲洗2-3次。

4、将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果，拍照。

诱导成软骨（以12孔板为例）

1、将传代或复苏冻存的间充质干细胞接种到12孔板上，置于37℃,5% CO2培养箱中培养；当间充质干细胞融合度达到80-90%时，开始诱导成软骨体细胞分化。吸掉间充质干细胞培养基，每孔加500ulPBS清洗一次，吸掉PBS，加入1 ml细胞诱导成软骨分化培养基。

2、2~3天更换新鲜的成软骨诱导培养基。

3、诱导7天后，观察细胞的形态变化及生长情况，是否有细胞团。如有可进行染色。

成软骨检测染液染色

1、成软骨诱导分化结束后，吸走12孔板中的培养基，用1×PBS冲洗1-2次。每孔加入500ul 4%多聚甲醛，固定10 min。

2、吸走细胞固定液，用1×PBS冲洗2次。，每孔中加入1 mL成软骨检测染色液室温染色15min。

3、吸走成软骨染液，用1×PBS冲洗2-3次。

4、将培养板置于显微镜下观察成软骨染色效果，拍照。

间充质干细胞

诱导分化

成脂

成骨

成软骨