该产品经过特殊的优化方案配置最合适 的反应缓冲液,其中含有热启动的Taq酶, dNTPs、PCR增强剂、PCR稳定剂、SYBR Green I染料以及具有仪器校准作用的ROX。 该产品的浓度为2x,使用时只需要加入cDNA 模板以及相应的上下游检测引物和水,将其制 成 1x工作溶液,即可进行Real-time PCR的检 测。经过多种优化探索,使得该产品在扩增特 异性、灵敏性以及数据的稳定性方面均具有突出的表现。该产品含有适用多种机型的ROX, 主要包括 ABI 7500/7500 fast/7900/ 7900HT /ABI QuaatStudio 3/5以及 Heal force X960等。
试剂盒组成
试剂盒成分 | M00601-1 | M00601-2 | M00601-3 |
2xSYBR Green qPCR Master Mix | 1.25 ml | 4x 1.25 ml | 12 x 1.25 ml |
DNase-ftee RNase- free H2O (自备) | 1ml | 4xlml | 12 x 1ml |
推荐qPCR反应体系(以20ul反应体系为例)
试剂盒成分 | 体积 | 终浓度 |
cDNA Template | 2ul | |
Forward Primer (10 uM) | 0.4ul | 0.2 uM |
Reverse Primer (10 uM) | 0.4ul | 0.2 uM |
2XSYBR Green qPCR Master Mix | 10ul | 1X |
DNase-free RNase-free H2O | 7.2ul | - |
Total volume | 20ul | - |
(对于基因组DNA,建议的模板量为10pg-1ug;对于质粒DNA,建议的模板量为10-107 Copies)
qPCR (三步法) | ||
94°C | 2min | |
94°C | 5sec _ | 40 cycles |
50-60°C | 15sec | |
72°C | 10sec _ | |
qPCR (两步法) | ||
94°C | 2min | |
94°C | 5sec — | 40 cycles |
60°C | 30sec — | |
高扩增效率选择三步法,高特异性选择两步法
注:
1、 使用时彻底化冻混匀;
2、 本产品仅供科学研究使用。
