细胞内新生RNA的变化是评价细胞活性的重要指标。EU (5-Ethynyl-Uridine) 是一种尿嘧啶核苷 类似物, 能够在细胞RNA转录时期代替尿嘧啶 (U) 掺入新合成的RNA分子中, 然后通过基于 EU 与荧光染料的特异性共轭反应,把荧光集团标记到新合成的含有 EU 的 RNA分子中,这样就可以 进行高效快速的荧光检测RNA的转录活性。本试剂盒将直接测定细胞内新生RNA的变化,病毒复制 等方面的研究。
传统的检测新生RNA的方法为以放射性同位素标记RNA等方法然后进行Southern blot进行检测。 但是这种方法需要放射性同位素标记及后续的复杂操作步骤。利用EU标记新生RNA的检测方法不需 要剧烈的RNA变性,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、RNA整体结构 及细胞内抗原识别位点,操作步骤更加快速、灵敏和准确,能在细胞和组织水平反映新生RNA转录 活性的状况。该试剂盒只需要简单的操作步骤,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜以及高内涵筛选 仪进行新生RNA的转录活性。
产品编号 | 试剂 | 浓度 | 试剂量 |
JX0906 | 细胞固定液 | 1× | 15 ml |
EU 溶液 | 1000× | 40 μl | |
反应缓冲液 | 10× | 1 ml | |
催化剂溶液 | 25× | 400 μl | |
TAMRA红色荧光溶液 | 400× | 25 μl | |
缓冲添加剂 | 粉末 | 200 mg | |
Hoechst 33342 | 1000× | 20 μl |
该试剂盒是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。 非贴壁细胞可在孵育EU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。
图注:将 J82 细胞分别不处理和用药物放线菌素 D(阴性对照药物)进行处理之后,通过该公司的 EU 新生 RNA 检测试剂盒检测正常细胞中显示非常强烈的 RNA 信号,而放线菌素 D 处理的细胞中 没有显著的信号。
