大鼠原代肝细胞分离培养与药物代谢模型构建

药物临床前肝毒性评价是新药研发必不可少的环节。HepG2 等肝癌细胞系 CYP450 酶谱表达缺陷，代谢特征和体内肝脏差距大；大鼠原代肝细胞保留肝脏细胞代谢功能，是体外肝代谢、肝损伤模型首选。

一、两步胶原酶灌流法原理

门静脉先灌流预灌洗液冲净血液，再灌注胶原酶溶液消化肝实质细胞，破坏肝细胞之间连接，释放肝细胞，经过离心纯化获得高活性肝细胞。

二、培养核心要点

• 培养板提前胶原包被，肝细胞贴壁依赖极强；

• 专用肝细胞培养基，维持 CYP 酶活性；

• 接种密度较高，低密度容易快速失活；

• 原代肝细胞体外存活周期短，功能窗口集中在接种后 24–72h，实验需要提前规划时间。

三、模型评价指标

• 肝细胞贴壁率、存活率；

• 白蛋白分泌、尿素合成；

• CYP450 酶活性检测；

• LDH 释放、ALT/AST 检测评价药物肝损伤。

四、难点优化

• 灌流速度稳定，避免肝脏破裂；

• 胶原酶活性控制，消化不足细胞产量低、消化过度细胞破碎；

• 去除库普弗细胞、胆管上皮杂细胞，纯化肝细胞。

君欣生物可提供大鼠原代肝细胞分离制备服务，配套肝细胞培养基、肝毒性检测外包，支持药物筛选课题。