原代细胞支原体污染检测与清除处理方案

原代细胞分离自动物或人体组织，组织内部携带支原体风险高，支原体体积微小，普通光学显微镜看不见，属于细胞培养中的隐形风险。很多课题数据重复性差、细胞状态莫名变差，根源就是支原体隐性污染。

一、支原体常用检测方式

1. PCR 法：灵敏度高，适合批量快速筛查；

2. 荧光染色法（Hoechst）：核外点状荧光，直观镜检；

3. 肉汤培养法：金标准，周期长，适合最终确证。

二、污染细胞处理路径

1. 轻度污染、细胞珍贵：使用支原体清除试剂连续处理多代，同步定期复检；

2. 重度污染、非稀缺细胞：建议直接灭活丢弃，避免交叉污染其他细胞；

3. 污染培养箱、超净台：全面消杀，定期通风。

三、原代细胞预防要点

• 原代组织取材环节严格无菌；

• 新复苏入库细胞必须先做支原体筛查；

• 不同细胞分区操作，耗材单独存放；

• 定期对培养箱水盘、管路消杀。

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