细胞培养中细菌与真菌污染的识别、来源与预防

细胞污染是细胞培养实验室最令人头疼的问题之一。其中细菌与真菌污染最直观、也最容易被察觉，但一旦出现，往往意味着整批细胞报废，甚至污染整个培养箱。相比支原体的隐性污染，细菌与真菌在发现时通常已处于爆发期，处理难度极大。因此，污染的预防远比补救重要。

一、污染镜下识别特征

细菌污染

• 培养基短时间内变浑浊、pH 快速下降变黄；

• 镜下可见大量细小点状、杆状颗粒在细胞间游动；

• 细菌增殖快，可能迅速掩盖细胞。

真菌污染

• 培养基出现絮状、丝状菌丝团块；

• 镜下可见菌丝、孢子或酵母样芽孢；

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• 污染区域常呈棉絮状漂浮在液面。

二、污染主要来源

1. 操作环节：超净台洁净度不足、操作不当、器械污染；

2. 耗材与培养基：试剂本身带菌、开盖污染；

3. 水浴与培养箱：水浴污染、培养箱潮湿滋生真菌；

4. 人员携带：手套、口鼻飞沫、衣物带入；

5. 组织样本：原代取材时样本本身带菌。

三、污染后的处理原则

1. 发现污染立即将污染瓶与正常瓶隔离，防止扩散；

2. 珍稀细胞轻度污染，可尝试使用广谱抗生素处理，但不推荐作为常规手段；

3. 严重污染且非稀缺细胞，建议直接丢弃并消毒处理；

4. 污染培养箱、超净台、水盘需全面消杀，不能只处理细胞。

四、预防体系（重点）

1. 超净台管理：使用前后紫外消毒，定期检测洁净度；

2. 无菌操作规范：操作前洗手、戴手套、酒精喷壶消毒；

3. 培养基现配现用：开封后及时使用，避免反复开盖；

4. 培养箱清洁：定期擦拭、更换水盘无菌水、添加抑菌剂；

5. 水浴清洁：水浴箱加入抑菌剂，定期换水；

6. 原代取材严格无菌：组织样本消毒彻底，减少引入风险。

五、日常监测建议

• 新复苏细胞入库前，先培养观察无污染再大量扩增；

• 每周镜下检查细胞培养物；

• 培养基开封记录日期，超期不用；

• 定期对培养体系做支原体与细菌真菌筛查。

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