NK 细胞无血清扩增培养与体外杀伤活性评价方案

自然杀伤细胞（NK 细胞）不需要预先致敏即可识别杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞，是肿瘤免疫、免疫检查点、细胞治疗方向热门研究模型。血清体系容易引入未知细胞因子，干扰杀伤活性结果，无血清定向扩增体系，是 NK 细胞功能实验的优选方案。

一、NK 细胞扩增原理

利用 IL-2、IL-15、SCF 等细胞因子组合，刺激外周血单个核细胞中的 NK 细胞选择性增殖，抑制 T 细胞过度扩增，经过 14–21 天扩增，NK 占比可达到较高水平。

二、扩增操作要点

1. PBMC 分离：密度梯度离心分离外周血单个核细胞；

2. 接种至 NK 无血清完全培养基，添加配套细胞因子；

3. 每 2–3 天补液，维持细胞密度，避免密度过高凋亡；

4. 全程无菌，定期镜下观察细胞集落形成。

三、NK 细胞活性检测方法

1. CFSE/7AAD 流式杀伤：标记靶细胞，共孵育后流式检测死亡靶细胞比例；

2. LDH 释放法：检测靶细胞裂解释放乳酸脱氢酶，计算杀伤效率；

3. 显微镜实时成像观察靶细胞裂解。

四、常见踩坑点

• 扩增效率低：细胞因子活性失效、起始 PBMC 活性差；

• 杂细胞占比高：细胞因子配比不合适，T 细胞优先扩增；

• 杀伤重复性差：效靶比设置不合理、孵育时间不统一。

  
  

君欣生物NK 无血清培养基适配体外 NK 扩增培养，同时承接 NK 细胞扩增、流式分型、细胞杀伤检测外包实验。